本发明公开了一种单一病毒收获液的冻融方法，属于疫苗制备工艺领域。该冻融方法包括以下步骤：(1)冻存：将单一病毒收获液冻存；(2)融解：将步骤(1)冻存后的单一病毒收获液融解。将乙型脑炎减毒活疫苗单一病毒收获液在本发明的冻融方法下冻融能够使单一病毒收获液在≤‑60℃条件下长期储存，等所有检定项目结束后，再投入下一步使用，用于乙型脑炎减毒活疫苗的制备。将本发明的乙型脑炎减毒活疫苗单一病毒收获液配合本发明的冻融方法，在显著延长储存时间的同时，还能显著减少病毒效价损失，无需进行中间品的风险放行，生产安排更加灵活、可控，也大大降低了因生产计划变动导致单一病毒收获液废弃的风险。