本发明涉及荧光材料及生物成像领域，公开了一种制备多色荧光碳点的方法和该方法制备获得的荧光碳点及应用。本发明提供的方法操作简单，原料易得，而且采用本发明的方法获得的多色荧光碳点在使用时也无需复杂处理，实现了对多色荧光碳点制备和使用过程的同时简化，利于多色荧光碳点的大规模生产和推广应用。此外，本发明提供的方法制备获得的多色荧光碳点生物相容性高、细胞毒性低、稳定性好，使其具备作为荧光探针在荧光检测，尤其是生物和医学检测中应用的潜力，应用前景广阔。