本发明属于生物检测技术领域，公开了基于纳米抗体的犬瘟热病毒抗原检测试纸条及其制备方法，该基于纳米抗体的犬瘟热病毒抗原检测试纸条，包括外壳和配套使用的样品稀释液，外壳内装配有试纸条，试纸条包括PVC底板，PVC底板上黏贴有样品垫、金标垫、包被膜和吸水垫，金标垫为玻璃纤维素膜，包被有纯化的抗犬瘟热病毒H蛋白纳米抗体与胶体金的偶联标记物；包被膜为硝酸纤维素膜，包被膜上涂设有一条包被有纯化抗犬瘟热病毒H蛋白纳米抗体的检测线和一条包被有羊抗鼠IgG抗体的质控线，本发明整体制造成本低廉、抗体与蛋白结合稳定、灵敏度较高、检测方便快速。