本发明提供了一种蔗糖磷酸化酶的应用及利用其制备2‑α‑甘油葡萄糖苷的方法。所述蔗糖磷酸化酶为游离酶或固定化酶；固定化酶的制备方法为：通过基因工程手段将序列1导入大肠杆菌表达得到游离酶，用CS‑TPP@NF载体固定游离酶，得到固定化酶。以蔗糖、甘油为底物，在水或水溶液中进行催化反应，得到2‑α‑甘油葡萄糖苷。本发明中筛选出的蔗糖磷酸化酶催化活性高，在24 h内能够将蔗糖快速转化，转化率达到95%，2‑α‑甘油葡萄糖苷产量可达288.28 g/L。同时本发明的固定化酶副产物耐受性比游离酶高30%、可回收再利用，在水溶液中反应，降低生产成本，工艺简单，适合大规模工业化生产。