本发明公开了一种获得四倍体艾纳香不定芽的方法，即选用二倍体艾纳香的根切段作为外植体，以含有0.025～0.1mg/L NAA、1.0～2.0mg/L 6‑BA和90～150mg/L秋水仙素的加倍培养基进行培养，诱导外植体细胞同时进行染色体加倍和分化不定芽。本发明填补了艾纳香根作为外植体的空白，增加了艾纳香在扩繁增殖和生物技术育种过程中有效外植体来源。更重要的是，本发明使艾纳香的根细胞直接在染色体加倍的同时分化形成不定芽，不必经过形成愈伤组织的过程，由此简化了技术环节，减少了再生芽的变异和嵌合体的产生；本发明应用于艾纳香多倍体育种，将可显著节省时间和人力成本，提高工作效率。