本发明涉及植物有效成分提取技术领域，尤其是涉及一种抑制5α还原酶活性的松针提取物及其制备方法和应用。本发明的抑制5α还原酶活性的松针提取物的制备方法，包括如下步骤：(A)采用醇溶液对松针进行提取得到松针提取物；(B)采用弱极性有机溶剂萃取所述松针提取物得到松针萃取物；(C)将所述松针萃取物经硅胶柱层析和液相色谱分离，在所述液相色谱分离的tR为12～30min时进行收集，得到所述松针提取物。采用该方法可以相对容易的从松针提取得到能够抑制5α还原酶活性的松针提取物，其包括落叶松脂醇和/或罗汉松脂素。