本发明公开了一种ATP法快速检测航油微生物污染的试剂及检测方法，其具体包括以下步骤：检测试剂的包装撕开，取出Buffer B和Buffer C置于反应管架上。将移液枪调至100μL刻度，在装吸头的袋子中装上吸头。吸取100μL待测样品，贴壁加入到Buffer B中，盖上管盖，用手指捏住Buffer B管的两头上下振荡5s，上下振荡不少于10次后重新放回反应管架上。将移液枪调至50μL刻度，在装吸头的袋子中装上吸头。吸取50μL上步骤中的Buffer B管内的液体，加入到Buffer C管内的液体中(吸头尖插入到液面下加入)，立即盖上管盖，用手指捏住Buffer C管的两头上下振荡5s，上下振荡不少于10次后，立即放入检测仪器内进行检测。检测结束后，用镊子将检测仪器内Buffer C管夹出，记录检测数据，检测仪器关机。