本发明适用于生物医学技术领域，提供了一种基于Cre‑lox重组系统的RIM3‑RNAi，包括一种Cre酶依赖的rAAV表达的RNAi表达载体，所述的表达载体包含顺次连接的：AAV2ITR，兴奋性神经元表达的启动子CaMKIIα，Cre酶依赖的RNAi表达盒，RIM3 RNAi发卡结构插入位点，WPRE，bGHpoly（A）signal以及AAV2ITR。本发明在生物信息学分析的基础上，发现小鼠痛模型中高表达的突触传递相关蛋白Rab3‑interacting molecule‑3(简称RIM3)，因此构建了shRNA干扰策略，可有效缓解痛模型动物的伤害性感受，本发明将为靶向镇痛治疗提供方向。