本发明涉及核酸提取领域，尤其涉及病毒核酸样品处理液、试剂、提取方法及其应用。本发明提供了样品处理液，其中组分1包括液化缓冲液：0.5~1.5 mg/mL蛋白酶K；组分2包括样品保存液：Tris‑HCl 10~25 mM，Triton X‑100 0.1~0.5%（v/v），DTT 1~10 mM，BSA 0.5~1 mg/mL，DMSO 0.2~0.5%（v/v），乙酰半胱氨酸0.1~0.2 M，TCEP‑HCl 2.5~10 mM。本发明病毒核酸提取无NaOH液化步骤，不降解或破坏病毒RNA核酸，回收纯化的核酸，可用于后续检测，具有病毒核酸回收率高、用时少、操作方便、易于临床推广的特点。