本申请提出了一种荧光免疫检测性激素多联试剂盒及其制备方法，涉及生物检测技术领域。多联试剂盒包括：外壳、样本缓冲液以及设置于上述外壳上的多个检测卡；外壳内设置至少三个卡槽，检测卡与卡槽一一对应；检测卡包括底板以及搭接于底板上的滤血垫、喷金垫、检测垫和吸水垫；喷金垫上喷涂有荧光微球偶联复合物，检测垫上设有检测带和质控带，检测带包被预设抗体或抗原；质控带包被生物素化‑BSA。本申请实施例的荧光免疫检测性激素多联试剂盒可同时获得多项指标检测结果，效率高，成本低的特点。另外，本申请实施例的荧光免疫检测性激素多联试剂盒的制备方法工艺简单，成本低。