本发明属于优化编码基因技术领域，公开了一种重组人III型胶原蛋白及其制备方法和应用，其氨基酸序列包括基本重复单元，基本重复单元为：GPPGPPGAIGPSGPAGKDGESGRPGRPGERGLPGPPGIKGPAGIPGFPGMKGHRGFDGRNGEKGETGAPGLKGENGLPGENGAPGPMGPRGAPGERGRPGLPGAAGARGNDGARGSDGQP，本发明提供的重组人III型胶原蛋白具备较为理想的稳定性，并适用于工业化放大生产。