本发提供一种基于纳米抗体的对硫磷农药胶体金标记物及其应用。本发明首次开发采用对硫磷纳米抗体与胶体金进行结合，制备对硫磷纳米抗体‑胶体金标记物，用于对硫磷农药的检测。采用对硫磷纳米抗体‑胶体金标记物进行检测稳定性好，灵敏度高；用其制备成对硫磷农药的纳米抗体胶体金试纸条，具有灵敏度高、特异性强、成本低、操作简单、检测时间短、易于储存、保质期长的优点。本发明提供的试纸条对对硫磷农药残留检测的灵敏度达到0.0013～0.085mg/kg，检测限为0.00069mg/kg，能用于蔬菜、水果等农产品中的对硫磷农药的快速检测，该方法简便、快速、直观、准确、适用范围广、成本低、易推广使用。