本发明涉及药用植物组织培养及中药材领域，具体涉及一种提高红大戟组培苗驯化成活率的培养基及其驯化方法，培养基包括：丛生芽诱导培养基、丛生芽增殖培养基和丛生芽生根培养基；培养步骤包括：外植体消毒、丛生芽诱导、丛生芽增殖、丛生芽生根和生根苗驯化。本发明在生根时，使用低浓度的2,4‑D及IBA搭配，可有效促进红大戟的生根，可使生根率接近100％，同时，在生根瓶培养基中添加了2.0～2.4μg/L的硝酸银及0.2～0.3mg/L的MET，能将生根苗的玻化现象完全抑制，能在很大程度上提高驯化成活率。