本发明涉及生物固定化技术，公开了一种生物分子的固定化方法及其应用。该生物分子的固定化方法包括以下步骤：在反应溶剂存在的条件下，将生物分子、金属盐与成型剂进行接触；其中，所述生物分子为细胞色素c和/或葡萄糖氧化酶，所述成型剂含有咪唑和/或咪唑衍生物。本发明还提供了该固定化方法得到的固定化生物分子，以及该固定化生物分子在生物检测器、食品生产和制备临床注射剂中的至少一者中的应用。该方法能够快速对生物分子进行固定化，提高生物分子的稳定性，高效保持生物分子的生物活性。