本发明公开了一种烟草及烟草制品中六种生物碱的液相色谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)样品提取：精密称取烟草及烟草制品粉末，使用氢氧化钠溶液湿润，加入三乙胺/乙酸乙酯溶液，超声一段时间，取上层液体，经过滤得到滤液；(2)检测：采用高效液相色谱法进行检测，即得到烟草及烟草制品中六种生物碱的含量。本发明的检测方法一次便可充分提取烟草及烟草制品中的生物碱，六种生物碱色谱峰具有较好的分离效果，色谱分析时间缩短至10min。