本发明公开了一种培养箱无菌检测机构及检测方法。包括：定位底座，与培养瓶形状适配，用于放置待检测的培养瓶；激光组件，发生的激光穿过培养瓶中的空气部分，根据吸收光谱判断微生物生长代谢的二氧化碳浓度；二氧化碳感应器，设置在培养瓶内的底部，根据微生物生长代谢的二氧化碳浓度发生颜色改变；相机，采集二氧化碳感应器的图像数据；数据处理装置，综合二氧化碳感应器的颜色和吸收光谱分析计算的二氧化碳浓度，获得最终的微生物生长判读结果。使用两种检测手段利于更早得出无菌检查样品的判读结果。代替人工检测，克服了经验需求和主观判断，能够及时判断并对微生物生长变化进行追溯。