本发明公开了一种五指毛桃组织培养方法，包括：选取五指毛桃顶芽作为外植体，将外植体洗净、消毒后冲洗，并吸干表面水分；将外植体接种到丛生芽诱导培养基中，将诱导出的丛生芽继而转入丛生芽诱导培养基中，丛生芽不断增殖及生长，获得大量丛生芽及小苗，用于在增殖培养基继代增殖、生根培养；将健壮小苗移转接至生根培养基上诱导生根，获得健壮的植株。本发明通过调整各培养阶段培养基组成，提升五指毛桃组织培养的诱导率、增殖系数和生根率以及移栽成活率，降低污染率与褐化率，提高五指毛桃的快繁效率。本发明的五指毛桃组织培养方法简便易操作，出苗率较高，植株健壮，缩短育苗时间，降低了育苗成本。