本发明公开了一种耐高温小卷蛾斯氏线虫的筛选与驯化方法及其应用，属于生物技术领域。该方法包括以下步骤：(1)将小卷蛾斯氏线虫悬浮液培养皿置入32℃的摇床3h，之后置于23℃培养箱中恢复1h，最置于摇床中35℃处理5h，处理完成后于23℃培养箱中恢复1h；(2)从同一培养皿中吸取数滴10μL/滴步骤(1)所处理的悬浮液分别置于载玻片上，统计每滴悬浮液中线虫的存活率；(3)繁殖培养皿中剩余的存活线虫，其产生的后代采用相同方式进行处理，当步骤(2)所统计的存活率都大于等于50％，则下一代的5h温度处理提升1℃，最终从35℃提升至38℃；(4)将38℃5h处理后存活率超过50％的线虫定义为耐热品系线虫。