本发明公开了一种果甜香马槟榔生物香料的制备方法及应用，制备方法包括：(1)将马槟榔进行前处理，并打粉；(2)去油除涩；(3)去2‑羟乙基芥子油甙除苦味；(4)酶解：将马槟榔粉末沉淀物制备成悬浊液，糖化酶添加到悬浊液中进行酶解；(5)提取浓缩：用55％的体积分数的乙醇溶液冷浸提取，浓缩后得到马槟榔浸膏，并用水充分回溶；(6)二次除涩：利用高速离心以及分液漏斗，分离除油得到最终马槟榔生物香料。本发明得到的果甜香马槟榔生物香料，嗅香发现可以完整保留马槟榔原有的果香味，将该香料添加到卷烟烟丝中，经卷烟评吸评价发现该香料能够增加特有的马槟榔果香的甜感，苦味消失，杂气明显减弱，矫正了卷烟吸味，改善了抽吸口感。