本发明属于医用止血材料技术领域，具体涉及一种具有生物活性的纳米止血海绵及其制备方法和应用，其结构为由分散的纳米纤维相互交联形成的纳米多孔三维结构；纳米多孔三维结构为气凝胶结构或疏松海绵结构；以脱细胞真皮基质等生物活性材料及中草药为原料，通过气凝胶技术及静电纺纳米海绵技术制备出气凝胶海绵和疏松海绵，具有高孔隙率、高表面积、高吸血率、低堆积密度和超轻等特性，可大幅度增强止血材料的止血性能和生物相容性。整体而言，脱细胞真皮基质纳米止血海绵制备成本低，制备方法简单，能够实现大规模量产，市场前景广阔。