本发明公开了一种硫量子点的制备方法及其在测定水样中头孢噻肟钠的应用，硫量子点的制备过程为：在反应容器中依次加入6.50mL H2O，6.50mL、50mmol/L的精氨酸和3.00mL、0.2mol/L的硫脲，于120℃搅拌条件下加入4.00mL、3wt%的双氧水并于120℃反应5.5h，最终合成浅黄色荧光硫量子点。本发明还具体公开了该硫量子点在测定水样中头孢噻肟钠的应用。本发明以硫脲为硫源，精氨酸为保护剂，采用自下而上方法一步合成硫量子点，基于该硫量子点具有高选择性识别头孢噻肟钠的独特特征，建立了高选择性、高灵敏检测头孢噻肟钠的新方法，并成功应用于水样中头孢噻肟钠的测定。