本发明公开了一种管路负压阈值确定及异常警示方法、装置、设备和介质，该方法包括：接收目标管路的管材安装完成指令，获取输出端与外界空气连通的目标管路中流体的常态压力值；对目标管路执行负压测量启动操作；在目标管路中的泵启动之后，若目标管路中流体压力满足预设负压恒定条件，则获取目标管路的负压比较值；获取管材安装完成指令中的管材更换参数，根据管材更换参数、常态压力值、负压比较值以及预设负压阈值模型确定目标管路的负压阈值。本发明在每一次管材更换之后，均可自动结合外界环境以及被更换管材的管材更换参数准确确定负压阈值，保证了根据该负压阈值对细胞分离过程进行异常警示的准确性，确保细胞分离过程顺利进行及安全性。