本发明属于动物模型构建技术领域，具体提供了一种CV‑B3感染的啮齿动物模型的构建方法和用途，其构建方法为通过腹腔注射或鼻腔滴注的方式对啮齿动物模型感染CV‑B3，建立CV‑B3感染的啮齿动物模型。本发明建立了一种可以用于柯萨奇B组3型(CV‑B3)病原研究的啮齿动物模型。该建模方法符合肠道病毒传播方式及临床手足口病患者发病规律、简单易行、建模周期短、可重复性高、模型稳定。在对开展柯萨奇B组3型病原感染中枢神经的途径和机制研究、药物评价、疫苗研发评价等方面具有重要的使用价值。