本发明涉及一种毛发中野生乌羽玉致幻成分麦司卡林的检测方法，步骤包括：S1、配制体积浓度为0.1％的甲酸乙腈溶液以及质量浓度为0.4ng/mL的内标甲醇溶液；S2、精密称取预处理后的待测毛发样品，并加入步骤S1所制得的内标甲醇溶液，后处理后即得待测样品溶液；S3、将步骤S2所制得的待测样品溶液注入液相色谱串联质谱系统中进行检测；S4、根据标准工作曲线，计算待测毛发样品中麦司卡林的质量浓度；本发明采用冷冻研磨技术作为后处理方法使得毛发样品中的麦司卡林得以释放，相较于其他碱水解、超声等方法，操作更简单，耗时更短；本发明的检测方法简单，灵敏度高，选择性好且分析时间短，仅需5分钟，适合应用于日常案件处理。