本发明公开了一种胸腺类器官微球及其制备方法与应用，向加有透明质酸钠凝胶的Transwell小室内接种胸腺混合细胞，放入DMEM/F12‑B27培养基孔板，37℃、5％CO2培养；所述胸腺混合细胞是由Tβ15b1基因编辑的永生化胸腺上皮细胞与胸腺细胞混合而成；在Transwell小室中加入透明质酸酶水溶液，37℃静置培养，收集沉淀并用含免疫球蛋白和海藻酸钠的PBS重悬，滴入氯化钙水溶液中，得所述胸腺类器官微球。本发明制备的胸腺类器官微球能在体外模拟胸腺微环境，具有诱导、维持T细胞定型和分化的能力，并在体内模拟正常小鼠胸腺生成，改善免疫缺陷，有效激发毛囊，使毛囊再生的生物工程策略成为可能。