本发明公开了一种互叶白千层一步法组织培养方法。本发明进行芽初步诱导、增殖、伸长及生根培养，均采用同一种含有一种低浓度激素的培养基，为MS培养基添加0.05mg/LBA、30g/L蔗糖和8g/L琼脂，pH5.8。利用该方法从野外取材到获得栽培苗，整个操作过程仅需4个月。之后，试管苗以42天为一个增殖周期，试管苗增殖效率4倍左右，试管苗移栽到土壤的存活率达100％。本发明方法既节约培养成本又简化操作，增殖时间短、生根率高、移栽成活率高，极大地缩短了互叶白千层种苗的生产周期，减少种苗变异风险；可满足目前对互叶白千层优良品种种苗生产技术的需要，在其优良种质维持中具有显著的科学、经济和社会效益意义。