本发明公开了一种乳酸菌发酵稳定剂及其制备方法和应用方法，所述乳酸菌发酵稳定剂包括糖类，D‑氨基酸及磷酸氢钙和抗坏血酸钠，所述乳酸菌发酵稳定剂为乳酸菌的发酵培养提供营养成分能被有效利用，提高了在乳酸菌培养后发酵液中活菌数；采用所述乳酸菌发酵稳定剂进行培养后的乳酸菌菌体在形态上变得又短又卵圆，使菌体表面积减小；改性了乳酸菌菌体细胞壁形状和强度，维持了其细胞膜和细胞壁的完整性；减少在冷冻过程中形成的冰晶对菌体的损伤，提高了乳酸菌的冷冻干燥的抗逆性，提高了乳酸菌在常温下的存活率；本发明提供的乳酸菌发酵稳定剂，配方组成简单、成本低廉，应用操作简便，能使乳酸菌的性质更稳定、生物活性更强、常温贮藏更久。