本发明公开了一种核酸酶的单克隆抗体及其应用，提供了一种鼠源粘质沙雷氏菌胞外核酸酶的单克隆抗体McAb‑A1H1H9B3或者McAb‑C1H4D4A2及产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞系，该单克隆抗体能够识别并特异性结合所述粘质沙雷氏菌胞外核酸酶。不仅可以用于制备SMNU核酸酶含量检测的试剂盒，还可以用于封闭SMNU核酸酶活性位点、阻断生物制品中引入的外源SMNU核酸酶的消化活性。其中，SMNU核酸酶定量检测试剂盒完善了试剂盒的各组分，各组分及试剂盒整体性能的稳定性都很高，37℃放置6天后，各组分回收率大于95%，有利于完善生物制品SMNU核酸酶残留检测标准，从而提高生物制品的安全性。