本发明提供了一种酪蛋白磷酸肽的提取纯化方法，本发明属于酪蛋白磷酸肽制备技术领域。本发明提供的一种酪蛋白磷酸肽的提取纯化方法，包括如下步骤：(1)牦牛乳酪蛋白溶液中加入0.8～1.2％的胰蛋白酶酶解，得到酶解牛乳酪蛋白；(2)酶解牛乳酪蛋白中依次加入钙离子和乙醇溶液，静置沉淀酪蛋白磷酸肽，得到粗酪蛋白磷酸肽；(3)粗酪蛋白磷酸肽使用201×7阴离子交换树脂纯化，盐酸洗脱，得到提纯的酪蛋白磷酸肽。本发明筛选出胰蛋白酶对牦牛乳酪蛋白进行酶解，采用钙乙醇沉淀法对酶解液中的CPP沉淀，通过采用强碱性阴离子树脂纯化CPP，得到的纯化CPP的氮磷比为6.81，P的回收率为95.5％。