本发明一种来源于肠杆菌的双向启动子及其应用，属于基因工程领域。为了寻找一种不需外源添加诱导剂的双向启动子。本发明提供了一种来源于肠杆菌的双向启动子，序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示，可以从正反两个方向同时启动基因的表达，且该启动子的正反两个方向的启动强度具有时间特异性，受到菌体生长时期的调控。本发明有望为合成生物学领域提供更有利的启动子元件，为发酵领域提供无需诱导剂诱导的启动子元件，在发酵工程领域具有广阔的应用空间和市场前景。