本发明提供了一种利用分型纳米纤维培养三维细胞球体的方法，属于纳米生物界面与组织工程技术领域，包括以下步骤：(1)将PLLA与明胶溶于六氟异丙醇，通过静电纺丝技术制备得到PLLA/明胶纳米纤维基体；(2)通过液相/气相诱导结晶方法，在步骤(1)所述的PLLA/明胶纳米纤维基体的表面包裹PLLA晶体得到分型纳米纤维；(3)将细胞培养于步骤(2)所述的分型纳米纤维上得到三维细胞球体。本发明基于静电纺丝技术和液相/气相界面诱导结晶方法，制备了一种分型纳米纤维，此纳米纤维支架为细胞球体的形成及培养提供了一个新的生物平台。