本发明属于生物技术领域，具体涉及NtMYB35转录因子在烟草抗黑胫病中的应用。本发明构建了SEQ ID NO:1所示的烟草NtMYB35转录因子过表达载体和敲除载体的转基因植株，分析了烟草疫霉侵染后植株木质素含量和参与木质素合成的基因表达水平，经分析可知NtMYB35转录因子属于R2R3‑MYB转录因子亚家族成员，能通过对木质素代谢途径基因的转录调控实现其对该途径的正向调节，进而显著增加烟草疫霉侵染后过表达株系和野生型植株的木质素含量，提高烟草抗黑胫病能力。