本发明提供一种酸响应的壳聚糖纳米胶束冻干粉及其制备方法和应用，该壳聚糖纳米胶束冻干粉的制备方法包括：将胺化合物和酸酐化合物反应，反应产物在催化剂作用下与壳聚糖进一步反应成壳聚糖纳米胶束，之后冻干。本发明的壳聚糖纳米胶束冻干粉具有很好的pH响应性，因此可以在细菌感染酸性微环境中释药，有效提高药物在感染部位的蓄积；还可以通过疏水作用装载光敏剂，极大提高了对光敏剂的包封效率，所获得的纳米制剂体外试验证明其具有良好的大肠杆菌抑菌效果。