本发明属于兽药中有效成分检测领域，提供了一种茵陈金花散中多种活性成分的同时测定方法，包括如下步骤：采用萃取剂对茵陈金花散样品进行超声萃取，离心、过滤，得提取液；采用超高效液相色谱法对多种主要成分同时进行定性定量检测，采用多通道色谱检测和3D扫描光谱图；色谱柱为Waters UPLC HSS T3色谱柱；梯度洗脱：甲醇‑1mol/L醋酸铵溶液(99∶1)为流动相A，水‑1mol/L醋酸铵溶液(99∶1)为流动相B，并对梯度洗脱程序进行了优化和探索。本发明的方法简便快速、分离效果好，测定精度高，结果重现性好，易于观察，专属性强，色谱峰峰形良好，既达到中国兽药典的要求，又节省时间、试剂。