本发明提供了一种核酸检测方法、引物、试纸条、试剂盒及其应用。具体的，本发明的核酸检测方法包括对待测核酸进行扩增并对扩增产物进行检测，具体的，利用修饰有第一标记物和包含至少一段特定结合序列的引物对待测核酸靶区域进行扩增，以便将第一标记物与至少一个特异性双链DNA结合位点引入到扩增产物中，再将扩增产物与结合了双链DNA结合蛋白或第二标记物的显色媒介混合，然后将上述混合物通过可捕获连接了显色媒介的扩增产物的检测线，此时，根据该检测线的显色情况进行结果判断。本发明通过采用特异性的双链DNA结合蛋白和非抗原‑抗体结合方式的标记物，避免了在检测中使用抗体，克服了抗体制备耗时长且成本高的缺陷，双链DNA结合蛋白制备简单，成本低，进而降低了整体的检测成本，同时，本发明还可大大提升检测的灵敏度。