本发明涉及基因工程技术领域，具体而言，涉及草莓HY5基因在调控草莓果实成熟周期中的应用、过表达载体及方法。该方法为构建含有草莓HY5基因的过表达载体，将所述过表达载体导入宿主菌，采用所述宿主菌对草莓果实进行瞬时遗传转化。HY5基因的过量表达可以使草莓果实延迟成熟，实现草莓经济效益的最大化。该方法可将草莓成熟时间延迟7～10天，并且保持果实大小、色泽和品质不受影响；该方法操作简单、调控效率高、调控效果好，可实现大规模推广。