本发明涉及病原培养技术领域，尤其涉及一种副猪嗜血杆菌的选择性培养基及其制备方法和应用。选择性培养基包括猪肺220‑280g、葡萄糖1‑3g、琼脂粉13‑17g、蛋白胨8‑12g、氯化钠3‑7g、壳聚糖8‑12g、丙酸钙3‑7g、青梅多糖13‑17g，氢氧化钠调节pH值为7.8±0.1，去离子水加至1L。该选择性培养基与目前HPS菌株分离常用的TSA+NAD培养基相比，HPS的分离率提高了20％，分离时间缩短了4倍，同时对所分离得到的HPS菌株的生物学特性没有影响，能够用于HPS菌株的快速分离鉴定，稳定性好，可降低分离鉴定成本，并提高分离准确率。