本发明公开了一种茶树离体再生组织的构建方法，属于植物组织培养技术领域。所述方法包括以下步骤：(1)采集茶树嫩枝的新梢，消毒后以新梢的茎尖作为外植体；(2)将外植体接种于愈伤组织培养基中进行黑暗培养，之后进行光照培养并通电处理，诱导分化丛生芽；(3)将分化生成的丛生芽依次接种于增殖培养基和生根培养基中进行培养，获得茶树离体再生幼苗；所述愈伤组织诱导培养基、增殖培养基和生根培养基中均添加褪黑素和抗坏血酸。抗坏血酸作为抗氧化剂，与褪黑素共同作用，加强了对茶树离体组织褐化的抑制效果，结合通电处理，进一步促进了丛生芽的分化与根的形成，促进茶树离体再生幼苗的生成，提高了茶树离体组织再生的效率。