本发明公开了一种环境介质中二噁英、多氯联苯和多溴联苯醚净化分离方法，其包括：制备预除杂后待净化分离的环境样品溶液；利用上下联用的A‑B酸碱联合分离柱将获得的环境样品溶液净化分离为两组有机污染物，其中第一组为多氯联苯和多溴联苯醚，第二组为二噁英类；A‑B酸碱联合分离柱中A柱为酸性净化柱，由下至上依次填充玻璃纤维、硫酸硅胶和无水硫酸钠；B柱为碱性分离柱，由下至上依次填充玻璃纤维、弗罗里硅酸镁、碱性氧化铝、碱性硅胶；第一组分别用正已烷和正己烷‑二氯甲烷混合溶剂洗脱；第二组用二氯甲烷洗脱，由B柱分离。该方法能够同时净化和分离多氯联苯、多溴联苯醚与二噁英类，获得的样品能够满足HRGC‑HRMS测定的样品溶液要求。