本发明公开了一种流感病毒疫苗血凝素含量测定方法及试剂盒。所述测定方法分别包被标准抗原/供试品到空白酶标板上，经过封闭后再加入抗血清反应，去掉未结合的抗血清后加入通用酶标抗体，去掉未结合的酶标抗体后显色、终止，设置酶标仪双波长（450nm/630nm）进行测定。以标准抗原血凝素浓度的对数值和对应吸光度450/630nm的对数值作直线回归，将供试品吸光度450/630nm的对数值代入曲线，得出供试品的血凝素含量。所述方法具有高灵敏度、高检测通量、耗时短、检测步骤简单、抗原血清消耗少的优点，可以检测任何亚型的血凝素，适用范围大。利用该方法的试剂盒包括包被液、PBST、封闭液、通用酶标抗体、抗体稀释液、显色液、终止液。