本发明公开了一种用于抗疲劳、提高运动能力的复合益生菌及制备方法和应用，属于生物医药技术领域。上述复合益生菌包括植物乳植杆菌、瑞士乳杆菌以及凝结芽孢杆菌，所述植物乳植杆菌的保藏编号为CGMCC No.14491，所述瑞士乳杆菌的保藏编号为CCTCC NO：M2019013，所述凝结芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO：M2017813。包含该复合益生菌的微生物菌剂，经试验发现，相比单一菌株或者任意两种菌株组合都能明显抗疲劳和提高运动能力的功能，为抗疲劳和提高运动能力的药物或者相关领域的研究提供了新的菌源。