本发明涉及了植物分子育种领域，具体的是一种油茶自交不亲和雌性决定因子S基因的鉴定方法及配套试剂盒。以待鉴定油茶的cDNA为扩增模板，采用CvS‑RNase‑2引物组中的引物对分别进行PCR扩增，根据扩增产物的有无以及大小确定待鉴定油茶自交不亲和雌性决定因子S基因；引物序列为：正向引物(5'‑3')：TCCGAACACTGCGTTTGCTG；反向引物(5'‑3')：ACAACTAAATCGCCCACGCATA。通过PCR扩增及目标产物的测序，可以实现油茶S基因的检测，系统解析油茶自交不亲和机理奠定基础，并为油茶分子育种选择提供了技术支撑。