本发明涉及B族维生素片的两种成分含量联合测定方法，包括以下步骤：S1.混合对照品溶液的制备：分别精密称取D‑泛酸钙、D‑生物素，分别溶解于溶剂中，得到混合对照品溶液，备用；S2.供试品溶液的制备：取B族维生素片，加入溶剂提取，过滤，取滤液，得供试品溶液，备用；S3.含量测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，检测含量，即得。本发明能够联合测定了族维生素片中泛酸、生物素两种化学成分的含量，具有简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握的优点。