本发明提供了一种自发性胃黏膜上皮细胞癌小鼠模型的构建方法及其应用，属于医学治疗技术领域。本发明首次将基因型为Tff1‑Cre的小鼠与Mst1fl/flMst2fl/fl小鼠进行系统性杂交，经过三轮回交之后，最终可稳定获得基因型为Mst1fl/flMst2fl/flTff1‑Cre小鼠。采用本发明方法构建所得的基因型小鼠在8月龄以后胃体和胃窦区域特异性地自发胃黏膜上皮细胞癌。采用本发明构建方法构建所得的基因型小鼠能够自发且快速的产生胃癌性状、发病率达到100％、性状稳定且能够稳定遗传。