本发明公开了一种菌株、生物制剂及其应用和烟叶醇化方法，涉及烟草领域。菌株：芽孢杆菌(Bacillus sp.YYZX2)；保藏编号：CCTCC M 20221804；保藏日期2022年11月15日。生物制剂包括芽孢杆菌、酵母菌、海藻糖及陈化烟粉。烟叶醇化：烟叶原料在负压中放置保持，再恢复至常压，用菌悬液喷洒于经过负压处理的烟叶表面后发酵得到发酵烟叶1；发酵烟叶1又在负压环境下放置保持，之后又恢复至常压进行发酵后得到发酵烟叶2；发酵烟叶2经过烘烤、平衡后得到醇化烟叶。本发明芽孢杆菌抗极端条件能力更强，醇化配方及负压回潮工艺提高了烟叶醇化效率和醇化品质。