本发明公开了自动化酶标催化底物放大杂化DNA信号的电化学微流控生物芯片及其应用，生物芯片包括试剂供给单元、微流控装置和废液收集装置，试剂供给单元与微流控装置的入口连接，废液收集装置与微流控装置的出口连接；通过在传感电极表面修饰核酸探针，待测核酸样品与核酸探针杂交，然后再链酶亲和素化的核酸捕获探针2与待测核酸样品杂交结合于电极表面，最后通过生物素和链酶亲和素之间的生物亲和作用，或者标记待测样品将生物素化标记的电化学活性酶结合到电极表面，催化底物变为电化学活性产物，从而放大信号，在电极上检测；该芯片极大提高检测灵敏度，降低样品用量，降低了检测成本，拓展了使用人群和地域；能够制成智能设备，具有很好的应用前景。