本发明公开了一种酰胺基烯胺类化合物及其制备方法与应用，该制备方法包括以下步骤：咪唑啉类化合物、水、活化炔类化合物和有机溶剂混合后，搅拌反应得到酰胺基烯胺类化合物。本发明的制备方法不需要使用催化剂，原料简单易得，反应条件温和简单，操作安全，原子利用率高，对官能团的容忍性好，适用于制备含各种取代基的酰胺基烯胺类化合物。本发明制备的酰胺基烯胺类化合物具有良好的生物相容性和非传统发光的性质，在荧光探针、生物成像方面具有良好的应用前景。