本发明公开了一种用于鸡毒支原体和滑液囊支原体的核酸检测试剂盒，所述试剂盒包括反应缓冲液、Bst DNA聚合酶、dNTPs、甜菜碱、石墨化碳纳米管、聚乙二醇甲醚、SYBR Green I、检测引物，所述检测引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。与传统检测试剂盒和检测方法相比，本发明方法具有简便快捷、特异性强、灵敏度高、重复性好的优点，在检测时间与检测成本方面均明显优于目前检测标准中的方法，适合于批量检测。