本发明提供了一种表达禽脑脊髓炎病毒P1和3C基因的重组禽痘病毒及其构建方法。本发明首先构建了AEV P1‑3C表达盒；将AEV P1‑3C表达盒插入pBlue‑FPV‑244载体，得到重组质粒FPV‑AEV；再构建eGFP表达盒；通过infusion技术，将eGFP表达盒插入到FPV‑AEV，获得FPV‑AEV‑eGFP；然后通过转染鸡胚成纤维细胞，筛选阳性克隆，得到带有eGFP筛选基因的重组禽痘病毒，最后通过cre酶剔除筛选基因，最终得到表达禽脑脊髓炎病毒P1和3C基因的重组禽痘病毒，该重组禽痘病毒制备的疫苗可以诱导机体产生抗AEV的特异性抗体，对鸡，尤其是雏鸡，起到免疫保护作用。