本发明公开了一种荧光素类物质在潜血痕迹显现中的应用。所述荧光素类物质为式Ⅰ或式Ⅱ所示化合物，基于所述荧光素类物质，本发明提供了一种潜血痕迹显现剂，为由荧光素类物质与下述任一种溶剂形成的溶液：水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、DMSO和DMF；溶液的pH值为3～5，优选4.3～4.9。本发明显现的方法适用于多种非渗透客体上的潜血痕迹显现，适用客体范围广，尤其对深色客体以及粗糙客体上的潜血痕迹有较好的显现效果，得到的纹线荧光亮度强，纹线较清晰、连贯，纹线与背景反差大。